Морозова К. С. Структурно-функціональні властивості червоного флуоресцентного білка TagRFP657 та його застосування у клітинній біології.

Об'єкт:червоний флуоресцентний білок TagRFP657 та його мутантні форми. Мета дисертації - З використанням молекулярного клонування, на основі кДНК флуоресцентного білка mKate з довжиною хвилі флуоресценції 635 нм створити новий білок з флуоресценцією понад 650 нм. Виявити зв'язок між первинною структурою TagRFP657 та його спектральними і біохімічними характеристиками. Проаналізувати можливості практичного застосування TagRFP657 у клітинній біології. Методи дослідження: полімеразна ланцюгова реакція, електрофорез у поліакриламідному гелі, методи трансфекції клітин у культурі, випадковий та сайт-спрямований мутагенези, аналіз первинної структури ДНК та білків, спектрофотометрія, флуориметрія, проточна цитофлуориметрія, флуоресцентна мікроскопія. Результати, новизна: вперше створено флуоресцентний білок TagRFP657 з максимумами збудження та флуоресценції 611 нм та 657 нм, відповідно. Встановлено зв'язок структури TagRFP657 з його флуоресцентними та біохімічними властивостями. Визначено кінетичні параметри реакцій формування хромофора. Молярний коефіцієнт екстинкції дорівнює 34000 М-1.см-1, квантовий вихід - 0,10. TagRFP657 характеризується рН-стабільністю з рКа 5,0 та фотостабільністю з півчасом фотознебарвлення 55 секунд. Півчас дозрівання білка при 37°С дорівнює 125 хв. Продемонстровано можливості застосування TagRFP657 у клітинній біології на модельних експериментах. Наведено приклад успішного застосування ФБ TagRFP657 у протоковій цитофлуориметрії. Сфера використання: клітинна біологія, онкологія, фармакологія, імунологія.