Карбовський Л. Л. Експресія циркадіальних та ретинобластома-залежних генів у клітинах гліоми з пригніченою активністю ERN1

1. Об'єкт дослідження: гени CSNK1, CSNK2, PER1, PER2, PER3, CLOCK, BMAL1, CRY1, DEC2, RB1, RBL1, RBAP48, RBAP46, KDM5A, JARID1B, E2F1, E2F3, RNF40, EID1 та CTIP людини. Мета дослідження: вивчення експресії генів основних циркадіальних факторів, казеїнкіназ 1-го та 2-го типів, генів ретинобластоми та асоційованих з ретинобластомою протеїнів у ERN1-дефіцитних клітинах гліоми лінії U87 за умов гіпоксії та дефіциту глютаміну або глюкози. Методи: виділення РНК, спектрофотометрія, електрофоретичний аналіз нуклеїнових кислот, синтез кДНК, метод імунопреципітації хроматину, методи полімеразної ланцюгової реакції. Теоретичні й практичні результати, новизна: встановлено, що блокада сигнального ензиму стресу ендоплазматичного ретикулуму ERN1 приводить до збільшення рівнів експресії мРНК PER1, PER3 та CLOCK і зниження рівнів мРНК CRY1, PER2, BMAL1, BMAL2 та DEC2. Більше того, рівні експресії більшості із досліджуваних генів збільшуються за умов відсутності у середовищі глюкози або глютаміну як у контрольних, так і у дефіцитних за ензимом ERN1 клітинах гліоми, але пригнічення ERN1 модифікує ефект цих ішемічних умов. Показано, що транскрипційний фактор XBP1 взаємодіє з промотором гена PER1 у клітинах гліоми, що свідчить про наявність ERN1-залежного шляху регуляції експресії гена PER1. Також показано, що експресія генів ретинобластоми та більшості пов'язаних з нею генів залежить від функції сигнального ензиму ERN1 за нормальних умов, так і за умов гіпоксії та відсутності глюкози чи глютаміну. Галузь використання результатів роботи: досліджені механізми регуляції експресії генів будуть сприяти виявленню перспективних генів-мішеней для розробки нових стратегій пригнічення росту злоякісних пухлин.