Ареф'єв В. Л. Система індикації та ідентифікації сальмонел в кормах на основі мультиплексної полімеразної ланцюгової реакції.

Об'єкт дослідження: система індикації та ідентифікації сальмонел. Предмет дослідження: методики виявлення генетичного матеріалу сальмонел (Salmonella spp., S. Enteritidis, S. Typhimurium, S. Dublin, S. Gallinarum-Pullorum, S. Typhi), система моніторингу контамінації сальмонелами об'єктів ветеринарно-санітарного нагляду. Дисертаційна робота присвячена розробці мультиплексной ПЛР-тест-системи для індикації бактерій роду Salmonella та одночасної ідентифікації серед них основних серологічних варіантів S. Enteritidis, S. Typhimurium, S. Dublin, S. Gallinarum-Pullorum, S. Typhi з метою виявлення мікробної контамінації кормів. Для загальнородової детекції сальмонел, а також ідентифікації S. Enteritidis, S. Typhimurium створено специфічні праймери до генів invA, sefA та fliC, які фланкують ділянки розміром 387, 299 і 433 п. н. відповідно. Проведено оптимізацію протоколу ампліфікації зі сконструйованими праймерними системами за температурними та часовими показниками. Зазначену методику покладено в основу створення тест-системи для виявлення та типування сальмонел "Multi-DNA-test-Salm" (ТУ У 21.2-00497087-159), яка згідно комісійного тестування є високочутливою (до 98 %) та специфічною (до 100 %) для детекції ДНК сальмонел у кормах. Проведено скринінгові дослідження кормів та їх складових щодо контамінації сальмонелами. Установлено, що діагностична чутливість тесту знаходиться на рівні 82,8 %, діагностична специфічність - 99,1 %, діагностична ефективність - 97,0 %. Визначено показник передбачуваної цінності позитивних результатів - 92,8 %. Зазначене свідчить про високу ступінь діагностичної значимості ПЛР-тест-системи. Установлено контамінацію 10,4 % зразків кормів тваринного та рослинного походження, які містять генетичний матеріал S. Enteritidis (5,3 %), S. Typhimurium (0,8 %), S. Dublin (1,4 %), S. Gallinarum-Pullorum (1,6 %), а також сальмонелами інших сероваріантів (1,4 %).