Базалій А. В. Роль адаптерного протеїну Ruk/CIN85 у рецептор-залежних механізмах активації NADPH-оксидази і внутрішньоклітинного сигналювання у пухлинних клітинах.

Об’єкт: молекулярні механізми контролю функціональної активності NADPH-оксидазного комплексу і редокс-залежного сигналювання. Мета: з’ясувати потенційну роль адаптерного протеїну Ruk/CIN85 у регулюванні функціональної активності NADPH-оксидаз та внутрішньоклітинного сигналювання в пухлинних клітинах. Методи: трансфекція клітин, визначення АФК хемілюмінесцентним методом з люмінолом, аналіз міграції з використанням модифікованої камери Бойдена, електрофорез протеїнів у ПААГ, Вестерн-блот аналіз, імунопреципітація, GST in vitro pull down аналіз, конфокальна прижиттєва мікроскопія. Продемонстровано існування регуляторного взаємозв’язку між рівнем експресії Ruk/CIN85 у пухлинних клітинах та інтенсивністю продукування АФК, залежного від функціонування NADPH-оксидаз. Отримано генетичні конструкції, що кодують внутрішньоклітинний біосенсор Н2О2, HyPer та злитий протеїн Ruk/CIN85-HyPer. З використанням прижиттєвої флуоресцентної мікроскопії продемонстровано співлокалізацію генерування Н2О2 та адаптерного протеїну Ruk/CIN85 у «dot»-подібних везикулярних структурах різних розмірів у тимчасово трансфікованих клітинах MCF-7. Показано, що попередня обробка клітин MCF-7 субклону G10 інгібітором збирання NADPH-оксидазного комплексу апоциніном і пасткою для АФК N-ацетилцистеїном призводить до реверсії тривалої активації кінази Akt на тимчасову з одночасним посиленням автофосфорилювання рецептора EGF та пригніченням клітинної міграції. Встановлено, що підвищене продукування АФК в клітинах MCF-7 із надекспресією адаптерного протеїну Ruk/CIN85 корелює з диференційними системними змінами у рівні експресії генів NOX.