Кривдюк І. В. ERN1-залежна регуляція експресії генів родин GADD та TNF рецепторів у клітинах гліоми

Об’єкт: механізми ERN1-опосередкованої проліферації клітин гліоми людини. Мета: – дослідження експресії генів родини GADD, а також генів рецепторів TNF та протеїнів, залучених у передачу сигналів від них, у клітинах гліоми лінії U87 за умов пригнічення активності сигнального ензиму стресу ендоплазматичного ретикулума ERN1, а також за умов гіпоксії та дефіциту глутаміну або глюкози, для з’ясування ролі цих генів в опосередкованому ERN1 контролі процесу проліферації клітин гліоми. Методи: культивування клітин гліоми лінії U87 та її субліній, виділення РНК із культури клітин гліоми, спектрофотометричні методи визначення концентрації РНК та їх спектральних характеристик, електрофоретичний аналіз нуклеїнових кислот, синтез комплементарних ДНК, оцінки рівня експресії генів за допомогою кількісної полімеразної ланцюгової реакції у реальному часі, клонування продуктів ампліфікації, вестерн-блот аналіз, комп’ютерний аналіз отриманих результатів та методи статистичного аналізу. Вперше було показано, що експресія генів родин GADD та TNF рецепторів, а також протеїнів, залучених у передачу сигналів від них, у клітинах гліоми лінії U87 залежить від функціональної активності ERN1, сенсорно-сигнального ензиму стресу ендоплазматичного ретикулума, причому виявлені зміни в експресії досліджених генів корелюють зі зменшенням інтенсивності проліферації клітин з пригніченою активністю ERN1. Встановлено, що зміни в експресії генів GADD34, GADD45, TNFRSF10D, TNFRSF21, RYBP та TNIP1 у клітинах гліоми за умови пригнічення ERN1 обумовлені виключенням саме кіназної активності цього ензиму, генів SESN1, GADD45 та BRE – виключенням ендорибонуклеазної активності ERN1, а генів GADD153, TNFRSF1А, TNFRSF10B, TNFRSF11В та FADD – обох його активностей.