Харькова А. П. ERN1-залежна регуляція експресії генів системи IGF у клітинах гліоми

Об’єкт: механізми ERN1-опосередкованої проліферації клітин гліоми людини. Мета: вивчити експресію генів протеїнів системи подібного до інсуліну фактора росту у клітинах гліоми лінії U87 за умов пригнічення функціональної активності ERN1, сигнального ензиму стресу ендоплазматичного ретикулума, для з’ясування їх ролі в опосередкованому ERN1 контролі процесів проліферації клітин гліоми. Методи: культивування клітин гліоми лінії U87 та її субліній, виділення тотальної РНК, спектрофотометричні методи визначення кількості та спектральних характеристик РНК, електрофорез нуклеїнових кислот, зворотна транскрипція, полімеразна ланцюгова реакція, кількісна полімеразна ланцюгова реакція, отримання цитозольних та ядерних фракцій протеїнів із культур клітин, осадження секреторних протеїнів з культурального середовища, спектрофотометричне визначення кількості протеїнів, електрофорез протеїнів у поліакриламідному гелі, імуноблотинг, комп’ютерний аналіз результатів кількісної полімеразної ланцюгової реакції, статистичні методи обробки даних. Вперше показано, що експресія генів IGF1, IGF2, IGF1R, IRS1, IGFBP1, IGFBP2, IGFBP3, IGFBP4, IGFBP5, IGFBP6 та IGF2BP3 залежить від активності ERN1 і може грати роль у контролі проліферації клітин гліоми. Встановлено, що рівень експресії генів основних пропроліферативних факторів системи IGF знижується за пригнічення ERN1 у клітинах гліоми на рівні мРНК та протеїну. Рівень експресії генів антипроліферативних факторів підвищується за умов пригнічення ензиму ERN1. IGFBP3, як основний інгібітор IGF, може відігравати ключову роль у пригніченні проліферації клітин гліоми за цих умов. Вперше показано, що пригнічення ензиму ERN1 модифікує ефекти гіпоксії, а також дефіциту глутаміну або глюкози на експресію частини досліджених генів.