Хоменко Я. В. Науково-експериментальне обґрунтування технології дот-імуноаналізу за бруцельозу та лейкозу великої рогатої худоби

Розроблено методологію отримання компонентів для діагностики шляхом постановки дот-імуноаналізу за бруцельозу та лейкозу великої рогатої худоби: удосконалено методику отримання ліпополісахариду антигену B. аbortus; обґрунтовано доцільність використання рекомбінантного антигену вірусу лейкозу великої рогатої худоби, що містить протеїни з молекулярними масами 24 та 51 kDa та визначено оптимальні їх концентрації в дот-імуноаналізі; оптимізовано методику (Hermanson G. T., 1996) кон’югації рекомбінантного білка G Streptococcus spр. із колоїдним золотом; розроблено технологію отримання кон’югату рекомбінантного білка G Streptococcus spp. із колоїдним вугіллям; обґрунтовано доцільність використання листового білого полістиролу (HIPS) і розроблено оригінальну методику крапельної сорбції на ньому бруцельозного та лейкозного антигенів. Оптимізовано умови постановки дот-імуноаналізу, зокрема визначено, що використання з метою розбавляння досліджуваних сироваток крові фосфатно-сольового буфера (рН 7,2–7,4), який містить 0,75 % желатини, 2,5 М сечовини і 0,01 % бензойної кислоти повністю усуває можливість неспецифічної взаємодії компонентів дот-імуноаналізу. Розроблено експрес-методику диференціювання Br. аbortus та Yersinia Enterocolitica на базі дот-імуноаналізу. Доведено, що специфічність, чутливість та відтворюваність результатів дот-імуноаналізу за використання розроблених компонентів та оптимізованих умов постановки дот-імуноаналізу в процесі діагностики бруцельозу та лейкозу великої рогатої худоби відповідають вимогам Міжнародного епізоотичного бюро: специфічність і чутливість становлять 100 %, відтворюваність – задовольняє сучасні вимоги щодо тест-систем даного типу (CV<10 %).