Стасик О. В. Ідентифікація гену GCR1, що контролює катаболітну репресію у метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha

1. Об'єкт: явище та молекулярні механізми катаболітної репресії у метилотрофних дріжджів. Мета: дослідження мутантів дріжджів H. polymorpha зпошкодженою катаболітною репресією та встановлення молекулярно-генетичної природи індукованих мутацій. Методи досліджень: методи генетичного аналізу, біохімічні: визначення активності ферментів , концентрацій інтермедіатів гліколізу, концентрацій поживних субстратів; молекулярно-генетичні: ПЛР, методи рекомбінантних ДНК; Вестерн блотінг; методи ультраструктурних досліджень: електронна мікроскопія, імуноцитохімія, флуоресцентна мікроскопія; методи омп'ютерного аналізу. Встановлено, що ідентифікований ген GCR1 кодує білок, гомологічний до транспортерів глюкози, що бере участь в механізмі глюкозної катаболітної репресії. Встановлено функціональну роль консервативного залишку серину-85 у послідовності Gcr1р, заміна якого призводить до модифікації функції Gcr1р, та сконструйовано штам з делецією відповідного гену. Вперше описано мутанти H. polymorpha здатні до конститутивного біогенезу пероксисом у середовищі з глюкозою та показано, що дисахариди мають незалежний від глюкозного сигнальний механізм репресії у H. polymorpha. Вперше описано феномен "оберненої диауксії" та розроблено систему для флуоресцентного мічення пероксисом у H. polymorpha Сфера використання - клітинна біологія, біотехнологія