Шуваєва Г. Ю. Експресія ізоформ адаптерного білка Ruk/CIN85 в пухлинах людини

Об'єкт дослідження: адаптерний білок Ruk/CIN85. Мета дослідження: проаналізувати експресію ізоформ Ruk/CIN85 у пухлинах людини. Методи дослідження: експресія рекомбінантних білків в бактерійній системі та в клітинах ссавців, афінна хроматографія білків, методи роботи з культурами клітин, гібридомна біотехнологія, отримання поліклональних антитіл, електрофорез білків в ПААГ та нуклеїнових кислот в агарозному гелі, Нозерн- та Вестерн- блот аналізи, імунопреципітація, метод імуногістохімії. Теоретичні і практичні результати: Дисертацію присвячено дослідженню особливостей експресії ізоформ адаптерного білка Ruk/CIN85 в пухлинах людини урогенітального (нирка, передміхурова залоза) та гліального походження. З метою реалізації основних завдань роботи отримано і проаналізовано поліклональні та моноклональні антитіла до С- і N-кінцевих фрагментів досліджуваного білка, відповідно. Встановлено, що профілі експресії ізоформ Ruk та його ортолога у людини, білка CIN85, їх здатність до олігомеризації є специфічними для ліній клітин різного видового та тканинного походження. Методами Нозерн-блот та імуноблот аналізу виявлено як зниження, так і підвищення експресії повнорозмірної форми Ruk/CIN85 у зразках світлоклітинної карциноми нирки людини. Показано, що зниження рівня експресії Rukl/CIN85 у досліджених зразках пухлин нирки супроводжується змінами субклітинної локалізації адаптерного білка - транслокацією до ядра та переважним накопиченням в примембранній зоні. Продемонстровано поліморфізм у рівні експресії повнорозмірної форми Ruk/CIN85 у зразках доброякісної гіперплазії передміхурової залози, тоді як в аденокарциномах експресія Rukl/CIN85 детектується на дуже низькому рівні або зовсім не детектується. Встановлено обернену залежність у рівні експресії Rukl/CIN85 і EGFR в центральній і периферійній ділянках зразків гліобластом: високий рівень експресії EGFR в центральних ділянках пухлин відповідає низькому рівню експресії Rukl/CIN85 і навпаки. Низький рівень експресії Rukl/CIN85 в досліджених неоплазіях співпадає з їх високим ступенем злоякісності, що дозволяє використати отримані дані для прогнозування розвитку онкологічних захворювань.