Капустяк К. Є. Мутація rib1-86 як інструмент для виявлення генів, задіяних у регуляції біосинтезу рибофлавіну та гомеостазу заліза у дріжджів pichia guilliermondii.

Дисертація присвячена дослідженню генетичних механізмів супресії мутації rib1-86, яка пошкоджує ген RIB1(кодує фермент ГТФ-циклогідролазу II, яка каталізує перший етап флавіногенезу) і спричиняє повну ауксотрофність по РФ у мутантів P. guilliermondii. Мутанти rib1-86 здатні спонтанно ревертувати до прототрофності по РФ з частотою до 10-6. Клонування і наступне секвенування мутантного алеля rib1-86 показало наявність точкової мутації у положенні + 620 п.н. вправо від старт-кодону. Заміна гуаніну на аденін в цій точці перетворює цистеїновий кодон на тирозиновий (C207Y). Генетичний аналіз колекції спонтанних ревертантів мутанта rib1-86 дозволив виявити 6 нових генів RED1-RED6 (reduction), що беруть участь у регуляції біосинтезу РФ та метаболізму заліза. У порівнянні із штамом дикого типу мутанти red характеризуються наступними властивостями: підвищеною активністю ГТФ-циклогидролази і РФ-синтази, а також збільшеним рівнем біосинтезу РФ; збільшеною Fe/Cu-редуктазной активністю і підвищеним вмістом негемінового заліза в клітинах; високою чутливістю до перехідних металів. Вперше показано, що у P. guilliermondii надсинтез РФ, викликаний дефіцитом іонів заліза або пошкодженням регуляторних генів, корелює із зростанням рівнів мРНК ключових ферментів цього біосинтетичного шляху