Цирульник А. О. Нові чинники, залучені в регуляцію синтезу флавінів у дріжджів Candida famata

У роботі додатково введено дріжджовий гомолог (RFE1_Dh) гена РФ-екскретази людини (BCRP1) для покращення сконструйованих раніше надсинтетиків РФ дріжджів Candida famata. Введення гена RFE1_Dh привело до підвищення продукції РФ у 1,5 раза рекомбінантними штамами BRP/RFE1 порівняно з реципієнтним штамом BRP, а також до зниження вмісту флавінів у клітинах. Отримані результати вказують, що шляхом посилення екскреції РФ можна підвищити рівень його продукції. Надекспресія гена транскрипційного фактора Sef1 під контролем промотора LAC4 забезпечила 1,5 кратне збільшення продукції РФ із використанням як живильного середовища молочної сироватки. Аналіз флавіногенної активності дріжджових надсинтетиків РФ AF-4, BRP, BRPI, BRP/RFE1, BRP/RFE1/prLAC4-SEF1 та BRPI/prLAC4-SEF1 також виявив здатність до високого рівня синтезу цього флавіну за використання молочної сироватки. Встановлено, що активний ріст та флавіногенез дріжджів у сироватці можливий лише при внесенні додаткового джерела Нітрогену у вигляді сечовини, амоній сульфату чи діамоній гідрофосфату (3 г/л) та при низькому вмісті лактози (2-5%). Використання молочної сироватки як живильного середовища для мікробного синтезу РФ значно знизить собівартість виробництва РФ. Заключною частиною роботи було одержання дріжджового продуцента бактерійної антибіотичної сполуки – амінорибофлавіну (АФ). Синтетичний ген rosB. S. davaonensis із необхідними модифікаціями кодонової системи, було введено у штам надсинтетик ФМН FP C. famata. Результати хроматографічного та мас-спектрометричного аналізів підтвердили, що одержані рекомбінантні штами FP/rosB C. famata продукують АФ у кількості 5 мг/л.