Сіндаровська Я. Р. Agrobacterium-опосередкована транзієнтна експресія генів рекомбінантних білків (GFP, бета-глюкуронідази та інтерферону альфа 2b) в рослинах роду Nicotiana L.

Дисертація присвячена розробці протоколу отримання рекомбінантних білків шляхом Agrobacterium-опосередкованої транзієнтної експресії відповідних трансгенів у рослинах. Метою роботи було розробити та оптимізувати умови для отримання рекомбінантних білків у рослинах методом Agrobacterium-опосередкованої транзієнтної експресії. Об'єктом дослідження була Agrobacterium-опосередкована транзієнтна експресія в рослинах. В роботі були використані методи: агроінфільтрація інтактних рослин, генетична трансформація рослин, молекулярно-біологічні методи, біохімічні та біофізичні методи визначення білків, іонообмінна хроматографія та метод титрування інтерферону. В результаті роботи вперше проведено відбір нових видів-продуцентів рекомбінантних білків серед рослин роду Nicotiana. Обрано види, в яких спостерігали високий вміст репортерного білка, отриманого в результаті транзієнтної експресії трансгену, при використанні різних типів векторних систем експресії (N. cavicola, N. exigua та N. excelsior). Вперше доведено, що найбільший вміст цільового білка спостерігали у 2му-6му або 2му-4му листках від апексу (в залежності від типу векторної системи) у дорослих рослин перед цвітінням Показано, що вірусний супресор сайленсингу генів р19 підвищує вміст репортерного білка. Вперше доведено, що екзогенні фітогормони, метилжасмонат та інгібітори його біосинтезу не впливали на вміст цільового білка при транзієнтній експресії. Вперше отримано трансгенні рослини N. benthamiana із кореневої культури "hairy roots" зі збільшеною біомасою (в умовах in vitro). Розроблено методику двох-стадійного очищення зеленого флуоресцентного білка. Методика дозволяє отримати 77% від початкової кількості білка з чистотою 85%. Вперше показано транзієнтну експресію гена бета-глюкуронідази в рослинах видів N. cavicola та N. excelsior. А також показано можливість отримання біологічно-активного білка людини (лейкоцитарного інтерферону альфа 2b) в рослинах N. excelsior після транзієнтної експресії трансгену. Результати роботи можуть бути використані при отриманні цільових білків важливих для медицини та фармакології шляхом транзієнтної експресії трансгенів у рослинах.