Яцишин В. Ю. Метаболічна інженерія неконвенційних дріжджів Candida famata з метою конструювання надпродуцентів флавінових нуклеотидів

Об'єкт дослідження: біосинтез флавінових нуклеотидів у дріжджів і регуляція цього процесу. Мета роботи: розробка підходів до конструювання надсинтетиків ФМН та ФАД на основі флавіногенних дріжджів Candida famata, використовуючи методи метаболічної інженерії. Методи дослідження: мікробіологічні, біохімічні, молекулярно-генетичні, математичної статистики. Вперше клоновано гени FMN1 та FAD1 дріжджів Debaryomyces hansenii. Розроблено схему генно-інженерного конструювання штамів дріжджів, здатних до нагромадження в культуральній рідині ФАД та (або) ФМН. Заміна нативного промотора клонованого гена FMN1 дріжджів D. hansenii на сильний промотор TEF1 C. famata викликає підвищення питомої активності РФ-кінази (до 200 разів) та зростання вмісту ФМН (до 1000 разів) у культуральній рідині рекомбінантних штамів C. famata. Введення гена FAD1 під контролем TEF1 промотора у штам-надсинтетик ФМН призводить до 7-15-кратного зростання питомої активності ФАД-синтетази і накопичення до 450 мг/л ФАД у культуральній рідині. Виявлено компоненти середовища, важливі для нагромадження ФМН та ФАД. Внаслідок оптимізації лише складу середовища культивування вдалося додатково підвищити синтез ФМН у 29-36 разів, а ФАД - у 28,5 раза. Сфери використання: прикладна мікробіологія, біотехнологія, біохімія.