Іщук О. П. Молекулярні механізми резистентності до високих температур та етилового спирту у неконвенційних дріжджів

Об'єкт дослідження: закономірності термо- та етанол-резистентності у неконвенційних дріжджів. Мета роботи: ідентифікація генів, відповідальних за резистентність до високих температур та етилового спирту у неконвенційних дріжджів H. polymorpha та D. bruxellensis на основі генетичного, біохімічного та молекулярно-біологічного дослідження мутантних штамів цих дріжджів. Методи дослідження: мікробіологічні, біохімічні, молекулярно-генетичні, математичної статистики. Показано роль кислої трегалази (Ath1p) та білків теплового шоку (Hsp104p, Hsp16p) у термотолерантності H. polymorpha. Ідентифіковано новий ген H. polymorpha (ETT1), який відповідає за резистентність до етанолу та високих температур. Трансформанти H. polymorpha, які надекспресують ETT1, мають в 3-10 разів підвищену резистентність до етанолу, денатуруючого агенту (AZC) та теплового шоку. Показано позитивний вплив гетерологічної експресії гену ацетилтрансферази MPR1 S. cerevisiae на резистентність H. polymorpha до етанолу. Трансформант, який містить 3 копії гену MPR1, характеризується в 10 разів підвищеною резистентністю до етанолу. Показано, що надекспресія гену PDC1, який кодує піруватдекарбоксилазу, у H. polymorpha може бути використана для конструювання покращених продуцентів етанолу за умов підвищених температур, оскільки PDC1-трансформанти продукують втричі більше етанолу. Розроблено методи генної інженерії для D. bruxellensis: систему трансформації на основі векторів, які містять ауксотрофні (URA3 та URA5) та домінантний (APH) маркери, репортерну систему на основі гену LAC4 Kluyveromyces lactis. Сфери використання: прикладна мікробіологія, біотехнологія, біохімія.