Соловйов О. О. Розробка прототипів тест-систем для ДНК діагностики деяких спадкових захворювань (муковісцидоз, спінальна м'язова атрофія, фенілкетонурія)

Об'єкт - мутації в генах PAH, CFTR, SMN1, які спричинюють спадкові захворювання моногенної природи: фенілкетонурію, муковісцидоз, спінальну м'язову атрофію. Мета - розробка прототипів тест-систем для молекулярно-генетичної діагностики найбільш розповсюджених спадкових захворювань моногенної природи - муковісцидозу, фенілкетонурії, спінальної м'язової атрофії з використанням сучасних генних біотехнологій. Методи - виділення та очищення ДНК, олігонуклеотидний синтез, полімеразна ланцюгова реакція, рестрикційний аналіз, секвенування, різні види гель-електрофорезу, ПЛР в реальному часі, біоінформатичне моделювання та статистична обробка даних. Результати та новизна - Вперше було розроблено та апробовано методичні підходи для детекції найбільш розповсюджених мутацій гена CFTR (муковісцидоз), використовуючи принципи алель-специфічної ПЛР та зондів типу TaqMan. Перевагою цих прототипів тест-систем у порівнянні з існуючими на ринку є їх висока ефективність у використанні при низькій вартості. Вперше створено методику кількісного ДНК-аналізу делеції 7-го екзону гена SMN1 (спінальна м'язова атрофія) та доведено її ефективність для виявлення гетерозиготного носійства даної мутації. Вперше розроблено платформу для скринінгу мутантних варіантів кодуючої послідовності гена PAH (фенілкетонурія) з використанням градієнтного гель-електрофорезу в денатуруючих умовах та доведено ефективність використання нового барвника Barva NA для візуалізації поліакриламідних гелів. Вперше створено банк референсних зразків ДНК з мутаціями в генах CFTR, SMN1 та PAH, які є невід'ємними складовими тест-систем для ДНК діагностики муковісцидозу, спінальної м'язової атрофії та фенілкетонурії. Галузь - біотехнологія.