Артуянц А. Ю. Теоретичне та експериментальне обґрунтування ефективних умов кріоконсервування дріжджоподібних грибів Candida albicans

Об'єкт дослідження - процеси кріоконсервування та збереження життєздатності і біологічних властивостей дріжджоподібних грибів C.albicans. Мета роботи - розробка та експериментальне обґрунтування ефективних умов кріоконсервування дріжджоподібних грибів Candida albicans. В роботі використовували наступні експериментальні та теоретичні методи: мікробіологічні, кріобіологічні, цитологічні та біохімічні методи; полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР); проточну цитофлуориметрію і скануючу конфокальну мікроскопію; методи математичного моделювання і статистичної обробки отриманих результатів. Апаратура: програмний заморожувач "Cryoson" (Germany); ампліфікатор "Терцик" (ДНК-технологія, Росія); проточний цитофлуоріметр FACS Calibur (BD, USA); лазерний скануючий конфокальний мікроскоп LSM 510 meta (Carl Zeiss, Germany). Проведено теоретичну оцінку залежності значення ефективної швидкості охолодження від процесів внутрішньоклітинного кристалоутворювання при заморожуванні дріжджоподібних грибів C.albicans в розчинах проникаючого кріопротектора ДМСО і отримано експериментальне підтвердження відповідних теоретичних результатів. Розроблено протокол ефективного режиму кріоконсервування дріжджоподібних грибів C.albicans, відповідно до якого суспензії клітин цього мікроорганізму в 5%-них розчинах ДМСО або гліцерину на пивному суслі охолоджують зі швидкістю від 3,5 до 7°С/хв до -40°С з наступним зануренням у рідкий азот. Цей режим забезпечує збереження життєздатності близько 90% клітин. Встановлено, що зберігання грибів C.albicans при стабільній температурі -196°С протягом чотирьох років (термін спостереження) не призводить до додаткової загибелі клітин і забезпечує збереження генетично детермінованих біологічних властивостей грибів C.albicans, які використовують для їх індикації, ідентифікації і є факторами патогенності (асиміляція і ферментація вуглеводів, чутливість до антимікотичних препаратів, адгезивні властивості). Розроблений протокол рекомендовано для застосування в практиці міжнародних, національних та відомчих колекцій і банків мікробних культур. Ефективність розробленої технології кріоконсервування дріжджоподібних грибів C.albicans апробована в умовах Низькотемпературного банку біологічних об'єктів ІПКіК НАН України.