Корбецька О. О. Підвищення запліднювальної здатності сперміїв кнурів за різних технологічних умов кріоконсервування

English version

Дисертація на здобуття ступеня кандидата наук

Державний реєстраційний номер

0414U000510

Здобувач

Спеціальність

  • 03.00.20 - Біотехнологія

25-02-2014

Спеціалізована вчена рада

Д 35.368.01

Інститут біології тварин НААН

Анотація

Об'єкт - фізіолого-біохімічні та морфологічні процеси у спермі кнурів за дії низьких температур при різних режимах її технологічної обробки. Мета: з'ясувати структурно-біохімічні та фізіологічні особливості сперміїв кнурів за різних технологічних умов кріоконсервування та розробити біотехнологічні методи підвищення якості сперми і запліднювальної здатності статевих клітин. Методи: біотехнологічні (відбір сперми, кріоконсервування, штучне осіменіння), фізіологічні (активність, виживаність, концентрація сперміїв, функціональність мембран), цитологічні (світлова та фазово-контрастна мікроскопія), морфобіохімічні (визначення активності ЛДГ (цілісність плазматичних мембран) та акрозину (збереженість акросом), кінематичні (CASA-аналіз), статистичні (біометрична обробка результатів). Новизна: на основі досліджень із застосуванням біохімічних, фізіологічних та біотехнологічних методів удосконалено метод кріоконсервування сперми кнурів. З'ясовано характер змін інтегральних показників якості сперми на різних технологічних етапах кріоконсервування та після розморожування. Уперше науково обґрунтовано розроблену ефективну систему упакування сперми для кріоконсервування сперми кнурів у "Zip-Lock" пакетах. Результати: встановлено можливість інкубації свіжоотриманих сперміїв кнурів у сім'яній плазмі впродовж 1 год., а також витримування сперми у середовищі "Екосперм" до 16 год., що вірогідно підвищує цілісність плазматичних мембран сперміїв та збереженість їх акросом (р<0,05-0,01). Удосконалено методи підготовки сперми кнурів до заморожування: режим центрифугування 1600g упродовж 5 хв, який забезпечує зменшення втрат сперміїв на 52,2 % (р<0,001), швидкість охолодження 1 °С/хв у температурному діапазоні від +15 до +5 °С, що економить майже 2 год., еквілібрація у середовищі з 6 % гліцерину впродовж 1 хв, що збільшує збереженість акросом сперміїв на 19,9 % (р<0,05) та їх виживаність на 12,7 % (р<0,05). Запропоновано використання "Zip-Lock" пакетів для фасування сперми кнурів, що вірогідно (р<0,05) підвищило цілісність плазматичних мембран сперміїв і кількість ТБК-активних продуктів у них після розморожування, а також розроблено ефективний режим розморожування сперми кнурів у "Zip-Lock" пакетах - 70 °С впродовж 8 с. Визначено оптимальні режими заморожування сперми кнурів: швидкість охолодження 5 °С/хв у діапазоні від +5 до - 6 °С та 40 °С/хв - від - 6 до - 70 °С, які забезпечили після розморожування вірогідно (р<0,05) вищу активність сперміїв, цілісність їх плазматичних мембран, збереженість акросом та виживаність.

Файли

Схожі дисертації