Горбатюк О. Б. Оптимізація методів отримання функціональних активних рекомбінантних білків в Escherichia coli

Дисертаційну роботу присвячено розробці та оптимізації методів отримання функціонально активних рекомбінантних білків в E. coli. Як об’єкти для дослідження обрано: МРТ-63, МРТ-83, МРТ-63-83 – білки, використання яких є перспективним для діагностики туберкульозу; SPAA(tr) – розробки субодиничної вакцини проти бешихи свиней; scFv–CBD – біоліганд для хроматографічного очищення цільових антигенів; SPA-CBD, SPA-CBD2, SPA-Cys – біоліганди для хроматографічного очищення IgG; SPA-ВAPmut – генно-інжененрний імунокон’югат для імунохімічних тестів. Із застосуванням модифікованого методу аутоіндукції 8 із 9 досліджуваних білків отримано у препаративних кількостях синтезом в E. coli. Для MPT-83, МРТ-63, MPT-63-83, SPAА(tr), SсFv-CBD, які накопичувались у вигляді бактеріальних тілець включення, розроблені ефективні схеми ренатурації in vitro та підтверджена їх функціональна активність. SPA-CBD, SPA-CBD2, SPA-Cys, SPA-BAPmut отримано в E. coli в розчинній формі. SPA-CBD, SPA-CBD2, SPA-Cys іммобілізовано на хроматографічних носіях. Отримані на їх основі афінні сорбенти використано з метою виділення фракції IgG з сироваток крові та асцитної рідини. Чистота IgG становила >95 %. SPA-BAPmut застосовано як універсальний вторинний імунореагент, що дозволяє виявляти менше ніж 0,2 нг антигену.