Кваско А. Ю. Створення посухостійких ліній пшениці з дріжджовими генами біосинтезу трегалози

Дисертаційна робота присвячена створенню посухостійких ліній пшениці м’якої української селекції методами Agrobacterium-опосередкованої трансформації in vitro та in planta з використанням генетичний векторних конструкцій з генами біосинтезу трегалози дріжджів TPS1 та TPS2. За допомогою методики Gateway-клонування створено генетичні векторні конструкції з дріжджовими генами біосинтезу трегалози TPS1 та TPS2: pGWB2-TPS1, pGWB2-TPS2 та pBract214-TPS1, pBract214-TPS2. Проведено Agrobacterium-опосередковану трансформацію тютюну – модельного рослинного об’єкту з конструкціями pGWB2-TPS1, pGWB2-TPS2 під контролем промотору вірусу мозаїки цвітної капусти (P35S). Для генетичної трансформації пшениці м’якої використовували вектори pBract214-TPS1, pBract214-TPS2 з цільовими генамиTPS1та TPS2 під контролем сильного конститутивного промотору убіхвітину кукурудзи (PUbi). Нами було введено в культуру in vitro сім сортів пшениці м’якої української селекції:Вихованка, Зимоярка, Миронівська 67, Щедрість, Журавка Одеська, Кесарія Поліська та Мірхад, з метою найвищими показниками морфогенетичного потенціалу. Було здійснено Agrobacterium-опосередковану трансформацію in vitro відібраних сортів пшениці. Вперше було проведено трансформацію пшениці методом in planta з використанням п’яти сортів пшениці української селекції. Трансгенну природу рослин тютюну та пшениці було підтверджено молекулярно-генетичним аналізом. У результаті проведеного ПЛР-аналізу з використанням специфічних праймерів до генів TPS1 та TPS2 було отримано фрагменти розміром 640 п.н. та 758 п.н., що відповідають позитивному контролю (векторним конструкціям з генами TPS1 та TPS2, відповідно). Аналіз отриманих ліній пшениці показав підвищену стійкість до посухи створених рослин.