Усенко М. О. Створення генно-інженерних кон’югатів і їх використання для виявлення та очищення важливих у терапевтичному значенні білків

Дисертаційна робота присвячена розробці методів отримання біфункціональних кон’югатів на основі цільових білків та маркерних молекул в E.coli. Було отримано штами-продуценти білків rhIL7-His, rhIL7-CBD та rhIL7-BAPmut. Оптимізовано методи отримання протеїнів у розчинній функціонально-активній формі ренатурацією in vitro. Злитий білок rhIL7-CBD, після іммобілізації на мікрокристалічній целюлозі СС31, та rhIL7-His, після іммобілізації на металоафінному сорбенті, було застосовано для отримання поліклональних антитіл, специфічних до інтерлнейкіну 7 людини з чистотою понад 95 %. Із застосуванням rhIL7-BAPmut проведено скринінг комбінаторної бібліотеки кДНК варіабельних генів імуноглобулінів. Отримано штами-продуценти E. coli злитого білка scFv(IFNβ1b)–ВAPmut та рекомбінантного аналога протеїнкінази ASK1 людини. Показано можливість застосування імунокон’югату scFv(IFNβ1b)–ВAPmut для виявлення інтерферону бета-1b людини. Визначено умови біосинтезу протеїнкінази ASK1, які забезпечили отримання у препаративній кількості ферменту з функціональною активністю, співставною з комерційно доступними аналогами. Проаналізовано варіабельність індивідуальних реакцій мононуклеарних клітин периферичної крові людини на rhIL7 як важливого прогностичного показника стану імунної системи для подальших імунологічних досліджень.