Мироновський М. Л. Системи клонування, нокаутування і аналізу експресії генів у стрептоміцетів

Об'єкт дослідження: системи клонування, нокаутування та експресії генів стрептоміцетів. Мета роботи: розробка нової системи визначення активності генів стрептоміцетів, їх регульованої експресії, а також створення ефективної системи клонування генів у штамі S. sioyaensis Lv81. Методи дослідження: мікробіологічні, молекулярно-генетичні, біохімічні, математичної статистики. На основі гена бета-глюкуронідази створено вектори для швидкого відбору штамів стрептоміцетів із нокаутами генів за кольором їх колоній, а також для визначення рівнів транскрипції генів та трансляції їх мРНК. Створено нову систему регульованої експресії генів стрептоміцетів на основі генів архебактерії Methanosarcina acetivorans, що ґрунтується на індукованій супресії стоп-кодону мРНК УАГ. Розроблено ефективні системи кон'югативного переносу ДНК, нокаутування генів і транспозонного мутагенезу для штаму S. sioyaensis Lv81. З'ясовано, що руйнування генів sioA, sioB, sioG, sioH, sioJ, sioN, sioO, sioQ та sioS S. sioyaensis призводить до припинення біосинтезу сіоміцину. Виявлено чотири позакластерних гени первинного метаболізму, що задіяні в біосинтезі сіоміцину. З'ясовано, що геном S. sioyaensis містить гени нерибосомних пептидсинтетаз, що задіяні в шести різних біосинтетичних шляхах. Створено нову репортерну систему для виявлення продуцентів антибіотиків тіопептидної родини. Сфери використання: прикладна генетика, біотехнологія, мікробіологія.