Гордієнко О. І. Біотехнологічні основи процесу ліофілізації та тривалого зберігання мікроорганізмів на прикладі виробничих штамів E.coli

Дисертація присвячена вивченню оптимізації біотехнологічного процесу тривалого зберігання колекційних штамів E. coli. За результатами досліджень розроблено комплексний системний підхід до визначення та оптимізації критичних етапів тривалого зберігання виробничого штаму E. coli 055. Критичними стадіями, що потребують оптимізації, визначено наступні: - відтворення типових видових ознак штаму E. coli 055 пасажуванням через організм лабораторних тварин; - оптимізація параметрів стадії досушування за ліофілізації; - оптимізація кількісно-якісного складу захисного середовища. Визначено оптимальні параметри стадії досушування: температуру та тривалість підігріву. Вони складають 23 С, 12 год та початкова концентрація клітин відповідно. Розроблено і запропоновано кількісно-якісний склад захисного середовища для ліофілізації і тривалого зберігання E. coli: 1 % желатини, 10 % сахарози та 0,3 % аеросилу А-300. Відпрацьовано підхід та показано, що оптимальними параметрами стадії досушування за ліофілізації E. coli є температура досушування 23 С, час 12 год та КУО 1 млн/см3. Розроблено і запропоновано кількісно-якісний склад захисного середовища (1 % желатини, 10 % сахарози, 0,3 % аеросилу А-300). Використання розробленого підходу при ліофілізації колекційного штаму підвищило вихід життєздатних клітин E. coli до 88 %. Проведено генетичну паспортизацію виробничого штаму E. coli 055 на основі дослідження нуклеотидної послідовності гену 16S рРНК. Порівняльним аналізом геномів колекційного і відновленого штамів доведено їх ідентичність до і після використання запропонованого нами комплексного підходу до процесу тривалого зберігання E. coli у колекції. Ключові слова: ліофілізація, етап досушування, аеросил, тривале зберігання, комплексний системний підхід, секвенування, E. coli 055.