Пірко Я. В. Поліморфізм довжини інтронів генів білків цитоскелету як ефективний інструмент генотипування рослин

исертаційне дослідження присвячено розробленню та впровадженню молекулярно-генетичних маркерів, що ґрунтуються на використанні поліморфізму інтронів генів білків цитоскелету (α-, β-, γ-тубулін та актин) для генетичної диференціації та генотипування рослин. Зокрема проведено аналіз існуючих геномних баз даних рослин на наявність послідовностей генів, що кодують α-, β-, γ-тубулін та актин. Досліджено їх екзон-інтронну структуру, здійснено вирівнювання послідовностей з метою отримання консенсусних послідовностей та підбір праймерів до консервативних ділянок геномів, що оточують інтрони генів. Підібрано як видоспецифічні, так і універсальні (що можуть бути використані у дослідженні багатьох видів рослин) вироджені праймери. Оцінено поліморфізм інтронів генів α-, β-, γ-тубулінів та актину на видовому, популяційному, сортовому та внутрішньосортовому рівнях у різних видів рослин. На підставі результатів аналізу поліморфізму інтронів генів α-, β-, γ-тубулінів та актину проведено генетичне профілювання таких господарсько цінних видів рослин, як льон-довгунець, рис посівний, пшениця, ячмінь, томат та картопля. Також завдяки оцінці поліморфізму довжини інтронів генів β-тубуліну та актину досліджено генетичну мінливість та диференційовано природні популяції егілопсів Aegilops biuncialis з Кримського півострову. Використовуючи аналіз поліморфізму інтронів генів актину та α-тубуліну генотиповано сорти томату (Solanum lycopersicum) та картоплі (Solanum tuberosum), отримано специфічні ДНК-профілі досліджених сортів. Оцінений міжсортовий та внутрішньосортовий поліморфізм довжини інтронів генів β-тубуліну та актину у різних сортів льону-довгунця. Показана висока ефективність використання ILP–маркерів, що базуються на оцінці поліморфізму інтронів генів цитоскелетних білків у порівнянні з SSR-маркерами на прикладі аналізу родів Linum L., Quercus L., Ulmus L. Продемонстровано зручність та надійність застосування методу ТВР-аналізу для молекулярно-генетичного маркування трав’янистих та деревних рослин, а також для вивчення окремих аспектів внутрішньовидового поліморфізму господарчо цінних, садово-паркових та лісоутворюючих порід. За допомогою ТВР-методу ідентифіковано унікальні патерни для 20 деревних видів рослин та створено молекулярні профілі кожного з цих видів. Вперше отримано специфічні ТВР-профілі мікроводоростей, які дозволили чітко диференціювати генотипи на різних таксономічних рівнях та підтвердити однорідність окремих зразків, що належать до одного штаму.