Немазаний І. О. Клонування гена та характеристика білка-партнера протеїнкінази рибосомного білка S6 коензим А-синтази

Роботу присвячено пошуку та характеристиці білків партнерів кінази S6 рибосомального білка (S6K1) методом дріжджової двогібридної системи. В результаті проведеного скринування кДНК бібліотеки ембріонів миші ідентифіковано кДНК нового S6K1-зв'язувального білка - КоА-синтази. Вперше клоновано кДНК ген, що кодує КоА-синтазу. Доведено, що КоА-синтаза має дефосфоКоА-кіназну та фосфопантотенатаденілтрансферазну активності та каталізує два останні етапи біосинтезу КоА. Вперше показано, що КоА-синтаза взаємодіє з S6K1 у клітинах дріжджів та у клітинах ссавців. Встановлено, що С-кінцеві ділянки S6K1 та КоА-синтази залучені до утворення білкового комплексу. Продемонстровано мітохондріальну локалізацію КоА-синтази методами конфокальної мікроскопії та субклітинного фракціонування з використанням специфічних антитіл. Виявлено, що КоА-синтаза не є субстратом для S6K1 та, що обидва ферменти не впливають на активність одне одного. Запропоновано, що ця взаємодія має структурну роль і дає можливість S6K1 наблизитися домітохондрії з метою фосфорилювання її мітохондріальних субстратів.