Горбенко О. М. Ідентифікація та характеристика білків-партнерів фосфатази PTEN

Об'єкт - молекулярні механізми функціонування сигнальних систем клітини. Мета - ідентифікувати нові функціональні зв'язки між фосфатазою PTEN та білками-учасниками різних сигнальних ланцюгів за допомогою двогібридної дріжджової системи та підтвердити виявлену в дріжджах взаємодію із використанням методів молекулярної біології in vitro та в системах вищих еукаріотів. Методи - клонування фрагментів кДНК та сайт-спрямований мутагенез, дріжджова двогібридна система, методи статевого злиття клітин дріжджів, поверхневий плазмонний резонанс BIAcore, преципітація білкових комплексів із використанням GST-злитих білків, гель-фільтрація. Результати та новизна - створено нові байт-конструкції, що експресують С-кінцеву та повнорозмірну мутантну форму PTEN. Вперше проведено скринування кДНК бібліотек раку кишечнику людини, 18-денного ембріона миші та клітин HeLa. Вперше виявлено вісім нових білкових партнерів PTEN, специфічність взаємодій яких підтверджено у клітинах дріжджів. Вперше отримано моноклональні антитілапроти FABP4. Вперше показато можливість утворення комплексу між PTEN та FABP4 in vitro та в клітинах жирової тканини. Вперше встановлено кореляцію експресії генів FABP4 та PTEN у процесі диференціації адипоцитів. Вперше запропоновано гіпотезу стосовно ролі ідентифікованих білково-білкових взаємодій фосфатази у адипоцитах.