Слончак А. М. Клітиноспецифічні особливості регуляції транскрипції гена глутатіон S-трансферази Р1 людини

Об'єкт - регуляція транскрипції гена глутатіон S-трансферази Р1 (GSTP1) людини. Мета - визначення ролі цис- та транс- діючих факторів у забезпеченні клітиноспецифічного рівня транскрипційної активності гена GSTP1. Методи - кількісна ЗТ-ПЛР, напівкількісний імуноблотинг, бісульфітна модифікація ДНК, полімеразна ланцюгова реакція, молекулярне клонування, культивування клітин та їх трансфекція, люциферазний тест, дослідження електрофоретичної рухлифості ДНК-білкових комплексів. Результати та новизна - у роботі досліджено роль цис- та транс- діючих факторів у забезпеченні клітиноспецифічного рівня експресії гена GSTP1 людини у клітинах молочної залози Hbl-100, меланоми Ме45, хоріокарциноми BeWo та у тканині плаценти. Встановлено, що сайти ARE та NF-kB промотору гена GSTP1 є позитивними регуляторними елементами, а сайти CRE та NF-kB-подібний - негативними. Вперше встановлено якісні відмінності у спектрі транскрипційних факторів, що взаємодіють із промотором гена GSTP1 в клітинах різного типу та з різним рівнем експресії гена; встановлено, що репресія транскрипції зумовлена дією транскрипційних факторів і може закріплюватись за рахунок метилування промотору. Вперше показано, що сайт CRE (елемент відповіді на цАМФ) промотору GSTP1 може відігравати роль негативного регуляторного елементу. Вперше встановлено, що рецептор естрогенів (ER) регулює транскрипцію гена GSTP1, зв'язуючись через невстановлений білок із позитивним регуляторним елементом ARE (елемент відповіді на антиоксиданти) та через білки Fos або Jun/Fos з негативним регуляторним елементом CRE. У контексті сучасних уявлень про будову та функціонування енхансосоми запропоновано модель, що пояснює одночасну взаємодію одного транскрипційного фактора як з негативним, так і з позитивним регуляторним елементом промотору. Одержані результати свідчать, що транскрипція гена глутатіон S-трансферази Р1 клітиноспецифічно регулюється ER та транскрипційним фактором NF-кB, що дає підстави розглядати ці транскрипційні фактори як потенційні мішені для розробки хемопревентивних препаратів. 2.