Кропивко С. В. Альтернативний сплайсинг та альтернативна транскрипція у створенні різноманіття транскриптів гена інтерсектину 1 людини

Об'єкт - регуляція експресії генів. Мета - визначити роль альтернативного сплайсинга та альтернативної транскрипції у створенні різноманіття ізоформ багатофункціонального адаптерного білка ITSN1 людини. Методи - молекулярно-біологічні методи, що включають полімеразну ланцюгову реакцію із використанням зворотної транскрипції (ЗТ-ПЛР) для аналізу експресії, клонування ДНК-фрагментів великого розміру, 5'RACE-аналіз, Саузерн-блот аналіз, методи клітинної біології, зокрема культивування клітинних ліній людини, люциферазний тест, біоінформатичний аналіз послідовностей ДНК. Результати та новизна - ідентифіковано три нових варіанти альтернативного сплайсинга з вирізанням екзонів первинного транскрипту мРНК гена ITSN1, виявлено та клоновано п'ятнадцять повнорозмірних транскриптів ITSN1 з різним набором екзонів. Проведено аналіз експресії ізоформ ITSN1 з делеціями 20-го та 35-го екзонів. Вперше проаналізовано структуру 5'UTR мРНК гена ITSN1 людини та проаналізовано експресію ізоформ з інсерціями екзонів 1а та 1b. З використанням біоінформатичних серверів UCSC Genome Bioinformatics та CAGE анотовано основний промотор гена ITSN1. Вперше ідентифіковано альтернативний промотор, який знаходиться у 5-му інтроні гена ITSN1. Проведено аналіз експресії транскриптів ITSN1, які утворюються з виявленого промотора, в тканинах людини. За допомогою люциферазного тесту підтверджено його функціональність in vivo, а за допомогою делеційних мутантів ідентифіковано критичний промоторний регіон, необхідний для транскрипції, та клоновано транскрипти повнорозмірної короткої форми ITSN1, які транскрибуються з альтернативного промотора.